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standard DIA蛋白组学建库

斯坦德集团是测试、研发、认证服务的行业推动者。作为一家长期与各企事业单位合作的中国大型检测研发机构，我们高效帮您处理管控企业风险、提高产品质量、提高课题通过率以及备案通过率等问题，我们专业为您及您的企业提供多领域测试、研发、认证服务。

项目流程

斯坦德集团是一家以生物医药及生命科学领域为核心，深耕生态环境、综合贸易、创新服务等专业领域的综合型高科技服务企业。我们拥有CMA、CNAS、CNCA资质，及进出口商品检验鉴定、工程设计、建筑业施工、水利工程质量检测等资质。旗下专业实验室能力覆盖生物、医药研究、医疗器械、化妆品、组学分析、消杀产品、环境监测、土壤检测、危废鉴别、场地调查、仪器分析等。斯坦德集团实验室覆盖全国各地区，可随时迅速响应您的需求，提供近距离、本地化的专业服务。

DIA 技术是目前主流的蛋白质组学定量技术，它采用DIA（Data Independent Acquisition，数据非依赖采集）技术进行数据采集，将整个质谱扫描质量范围分为若干小窗口，依次对每个窗口的所有离子进行碎裂，使其能够对扫描区间内的所有肽段离子进行高速一级 MS 扫描再进行二级 MS/MS 分析。因此，DIA 能够对复杂样品中几乎所有可检测的分子进行定量测定。DIA 综合了 shotgun proteomics 高通量检测的特点与精准定量分析的优势，是真正意义上的全景质谱检测手段。

DIA蛋白组学项目流程

图7.jpg

技术流程

提取样品中总蛋白，取出一部分做蛋白浓度测定及 SDS-PAGE 检测，另取部分进行胰蛋白酶酶解，对酶解肽段除盐之后，对样品进行 LC-MS/MS 鉴定。LC-MS/MS 鉴定分为两个主要步骤，第一步采用传统的 DDA 方法建立蛋白谱图库，第二步采用 DIA 技术采集每个样品的质谱数据，在 DDA 数据库的基础上进行谱图匹配、定量信息的提取以及后续统计分析等。

技术优势

①全景扫描，数据覆盖度高；②样品种类不限，数量不限制；③重复性好，稳定性好，数据可回溯；④尤其适合大队列样本，血清样本；

数据分析

图8.jpg

检测项目

送样要求

蛋白检测样品量要求
实验类型	DIA
样品类型	建议量	最低量	生物学重复
动物组织	200mg	50mg	≥3
动物毛发等	200mg	50mg	≥3
软骨组织	500mg	200mg	≥3
植物茎、叶、花等	300mg	200mg	≥3
树根、树皮	1000mg	500mg	≥3
鲜果肉	20g	10g	≥3
菌类（菌体沉淀）	500mg	200mg	≥3
	（10^7）		≥3
悬浮/贴壁细胞	≥1×10^7	≥5×10^6	≥3
血清/血浆	≥500 μL	200 μL	≥3
脑脊液等体液	10ml	5ml	≥3
蛋白溶液	500ug	200ug	≥3
蛋白干粉	150ug	100ug	≥3
蛋白组学送样注意事项
1.建议所有样品提供原样即可，特殊需自己提取蛋白的，请附上详细的操作流程及试剂。
2.样品-80℃保存，避免冻融，在寄送时请保证干冰量充足。
3.样品标记清晰明确，与样品信息单中保持一致。
4.如果样品成分含有毒性或腐蚀性物质，必须事先声明，并在样品登记表和样品标签上注明。
5.如果样品为病原性微生物或者具有侵染性的病变组织必须严格灭活后再送样并在样品登记表和样品标签上注明。此项非常重要请务必重视！！
6.物种不同会导致样本量收集难度不同，如不清楚量是否足够，请提前咨询。
7.生物学重复的样品请备注清楚；如条件允许，请将每个样品的量在样品信息单中表明。
8.注修饰类请单独咨询。